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[00335582]黄芪多糖的提纯工艺及其对红细胞免疫功能的调节

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类型: 非专利

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技术详细介绍

该项目为山西省农业与社会发展科技攻关项目,编号为033021。 我国有众多源自传统中药的单味提取物在临床上长期使用,这将成为我国先导物发现的不竭源泉,并且药生物活性成分的提取、纯化及化学分析是研究中药中效应物质及其效应机制的重要基础。本项目依据响应面法原理,使用Design Expert(Static Made Easy, Minneapolis,MN,USA. version 6.0.5,2001)软件进行优化实验方案的设计,建立试验数学模型,对影响APS得率的四个主要因素(时间、温度、液料比、提取溶液pH值)进行了条件优化,建立了以工业化微波萃取为核心技术的APS提纯工艺条件;分析了所获AHPS的理化性质,并建立了疾病模型、细胞培养体系等;以红细胞免疫粘附功能为主要观察对象,证实了AHPS的生物活性。该技术经两家兽药企业应用,产品具有良好的应用效果。 本项目所完成的主要技术指标如下: 1.建立了工业化微波提纯AHPS的最佳工艺条件:黄芪粉碎后过100目筛,按液料比8:1浸泡过夜后调pH=10,微波加热时间20min、加热温度120℃;AHPS得率达32%、纯度达44.4%,精致后AHPS含量达97.16%。AHPS外观表现为灰白色粉末状固体,其本身无臭、无味,易溶于水,水溶液呈浅黄色粘稠状,不溶于丙酮、乙腈、甲醇、异丙醚等有机溶剂。AHPS对光、湿不稳定,在60℃和光照条件下含量10天下降>5%,在相对湿度92.5±5%的环境下10天吸湿<5%。AHPS分子量为1.1×104Da,单糖组成及其分子摩尔比为Rha:Glc:Gal:Ara=1.19:72.01:5.85:20.95,主要构型为α吡喃环结构,主链由葡萄糖以1→6糖苷键连接而成;酶法脱除cAHPS中蛋白的最佳条件,按200mg cAHPS添加1mg中性蛋白酶,50℃水浴酶解2h; 2.AHPS在热失重(TG)和差示扫描量热法(DSC)中的热特性规律基本一致,在260℃以下相对稳定,在311.4℃(空气)和322.1℃(氮气)出现快速失重; 3.AHPS急性和长期毒性试验中,动物在体重、血液学指标、血液生化学指标、和脏器系数等方面无显著改变; 4.AHPS可显著提高正常、免疫接种、病毒感染动物红细胞的免疫粘附和免疫清除能力,并显著改善自身免疫性疾病实验动物的原发性和继发性症状,显著提高其红细胞免疫粘附受体的表达水平、降低血液中CIC的含量、减少组织中IC的沉积、抑制促炎因子分泌、下调Bcl-2和上调Bax蛋白表达诱导炎症组织中的细胞凋亡; 5.AHPS不能够促进体外培养T淋巴细胞的增殖活化,并可抑制PHA诱导的T淋巴细胞增殖活性,但可与红细胞协同促进T淋巴细胞增值分化。

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