[00336292]同时检测HIV抗原（P24）和基因降低窗口期的基础研究

一、课题来源与背景 1.课题来源 《同时检测HIV抗原（P24）和基因降低窗口期的基础研究》是国家自然科学基金地区科学基金项目,项目批准号：30960104,资助金额：20万元。 2.背景 目前对艾滋病至今尚无确切有效的药物,患者最终几乎都将死于反复的感染或肿瘤。如果早期筛选出HIV 感染者,并指导其采取健康的生活方式,使用抗病毒的药物,重建机体和免疫功能及积极治疗各种机会性感染,增加患者的生存机会显得极为重要。因此,建立一种灵敏性高、特异性强、高通量的检测方法缩短窗口期极为重要。 二、研究目的与意义 本课题利用核酸适配体实时定量-PCR 对蛋白和核酸同时检测技术,提高血液艾滋病病毒的检测灵敏度和特异性,缩短窗口期。核酸信标配基检测技术是利用指数级富集的配基进化系统（SELEX）筛选P24抗原的特异性寡核苷酸配基,再通过核酸信标配基分子构建,建立的核酸信标配基-PCR检测技术。该项技术和基因检测技术可以在同一检测水平上对病毒颗粒中的抗原和基因进行实时定量-PCR检测。这样既可提高抗原的检测灵敏度,也提高了艾滋病基因检测的准确率。为艾滋病窗口期的检测提供有效的技术方法。 三、主要论点与论据 1. HIV-p24 抗原核酸信标配基的筛选及活性鉴定。 1)利用SELEX 技术筛选P24 核酸信标配基; 2)利用琼脂糖凝胶阻滞技术对核酸信标配基进行活性鉴定; 2. HIV-p24 抗原核酸信标配基检测技术的研究。 1)建立核酸信标配基实时定量-PCR 检测技术; 2)建立核酸信标配基检测技术与ELISA 检测技术的对比试验研究; 3. 建立对HIV-p24 抗原和基因同时检测技术的研究。 四、创见与创新 1. 筛选到 HIV-p24 抗原的12 条核酸适配体,并构建了核酸信标配基; 2. 建立以硝酸纤维素为载体的核酸信标配基实时定量-PCR 检测技术; 3. 建立以硝酸纤维素为载体HIV P24 抗原和基因同时检测技术的研究; 4. 建立以琼脂磁珠双库适配体电泳筛选技术（拟申请专利）; 5. 建立以琼脂磁珠为载体的蛋白和基因实时定量-PCR 同时检测技术（拟申请专利）。 五、社会经济效益,存在的问题 1.社会经济效益 1)利用以琼脂磁珠双库适配体电泳筛选技术,可完成对蛋白等多种靶分子的快速筛选,其配基特异性高,结合力强等;利用核酸信标配基实时定量-PCR 检测技术,提高靶分子的检测灵敏度,该技术在生物医学等领域的普及、开发、应用具有重要意义; 2)利用蛋白等多靶分子实时定量-PCR 同时检测技术,建立蛋白和基因实时定量-PCR 同时检测技术,为提高生物体内多分子相关性研究,在蛋白质组学、基因组学、疾病分子检测监控等领域提供技术支持; 3)利用琼脂磁珠为载体的蛋白等多靶实时定量-PCR 同时检测技术,结合磁珠基因提取和实时定量-PCR,可建立以琼脂磁珠为载体的蛋白和基因实时定量-PCR 同时检测技术,该技术便于机械操作完成,为生物医学的发展提供有力的技术支持。 2.存在的问题 1)为配合蛋白和基因同时实时定量-PCR 检测技术,该技术所用的附着靶分子的载体非常重要,无现成的载体所用,载体的研究也非本专业研究范围,故研究花费了大量的时间和精力,目前还处于完善阶段; 2)由于该技术可机械化操作,但时间仓促未完成系统机械化操作。 六、历年获奖情况 无。