[00336207]应激对酒精奖赏记忆的影响及其信号转导通路的分子机制

1.项目计划任务完成情况： 已完成了应激模型的建立,并筛选出合适的酒精剂量及CPP的训练时间。成功建立酒精奖赏记忆的获得、巩固、唤起的CPP行为模型。通过脑内立体定位注射NMDA受体甘氨酸位点拮抗剂7-CTKA,明确了其对应激诱导酒精奖赏记忆不同过程（获得、巩固、唤起、再巩固和消退）的影响。确定了伏核中NMDA -CaMKⅣ-CREB（磷酸化）-BDNF-TrkB信号转导通路在应激诱导酒精奖赏记忆形成中的分子学机制。 2.解决的关键科学问题和技术问题： 1)既往研究提示未经处理的大鼠很难形成酒精条件性位置偏爱（CPP）,甚至多会形成条件性位置偏恶,已经证实应激可以诱导大鼠形成酒精CPP。可是应激的方式、强度及时间长度并无统一标准,亦决定了是否形成酒精CPP的结果。单一持续应激（SPS）多应用于PTSD的研究,未见应用于酒精奖赏记忆的研究。本项目证实了SPS可以促进CPP（酒精腹腔注射 1.5mg/kg-20min）建立,这为今后研究应激促发酒依赖复饮提供了有力的行为学模型。 2)采用脑内核团微注射技术,将NMDAR甘氨酸结合位点拮抗剂7-CTKA定位注射在大鼠伏核内,并结合western blot技术检测伏核内钙调节蛋白依赖性激酶Ⅳ（CaMKIV）、p-CREB及BDNF及TrkB蛋白水平的变化,明确了NMDA受体中甘氨酸亚基及其信号通路是否参与应激诱导的酒精奖赏记忆形成及其可能机制。 3.创新点：1)有关诱导酒精CPP形成的应激模型多为一种中等强度的足底电击、束缚、强迫游泳或心理社会应激等,未见有研究采用单一持续应激模式（束缚+强迫游泳）,既往单一持续应激多应用于PTSD的研究,本项目已经证明采用单一持续应激模型可以诱导酒精CPP的形成,和对不同酒精剂量和训练时间的大鼠酒精CPP形成的影响,其中仅酒精腹腔注射 1.5mg/kg-20min组可以有效建立CPP,以及7-CTKA对应激诱导大鼠酒精奖赏性记忆获得、巩固、唤起、再巩固和消退的影响。这为今后研究应激促发酒依赖复饮提供了有力的行为学模型。 2)目前有关NMDA受体在应激诱导酒精CPP中的机制研究主要为NMDA竞争性或非竞争性受体拮抗剂,其中关于NMDA甘氨酸结合位点拮抗剂的研究较少,未见有7-CTKA 对应激诱导酒精CPP研究的报道。本项目采用脑内核团微注射技术,将NMDAR甘氨酸结合位点拮抗剂定位注射在大鼠伏核内,并结合western blot技术检测伏核内钙调节蛋白依赖性激酶Ⅳ（CaMKIV）、p-CREB、BDNF及TrkB蛋白水平的变化,明确了NMDA受体中甘氨酸亚基参与了应激诱导的酒精奖赏记忆形成及其机制。 4.社会效益：本项目明确SPS应激对诱导酒精CPP的影响及其与酒精剂量和训练时间的关系,阐明应激对酒精奖赏记忆过程（获得、巩固、唤起、再巩固和消退）的影响,并进一步研究两者内在的神经生物学分子机制,为应激相关障碍和酒精成瘾共病治疗提供理论基础。