[00336133]抗巨噬细胞移动抑制因子抗体治疗炎症性肠病效果的实验研究

1、 课题来源与背景; ①课题来源：广西壮族自治区卫生厅计划课题（重2011018）。 ②研究背景：溃疡性结肠炎（UC）是炎症性肠病（IBD）的一种类型,我国的发病率日渐升高,主要临床表现为腹痛、排便次数增多、黏液脓血便、里急后重,病情呈反复发作、逐渐进展的慢性过程。UC治疗以抑制肠道炎症反应、促进结肠黏膜愈合、调节肠道免疫等为原则,我国目前常用的药物有5-氨基水杨酸制剂、激素及免疫抑制剂等,但多数患者治疗缓解后反复发作,并逐渐加重,需要终身治疗,重者需要外科手术,严重影响生存质量。 UC病因及发病机制尚未明确,但是细胞因子的失衡与UC的发病尤显重要。MIF参与UC的发病,并对UC的主要促炎因子发挥调控作用,从而干预炎症反应;NF-κB作为一种多向转录调节因子,可以促使效应细胞分泌多种炎性因子,NF-κB信号转导通路在UC发病过程中呈现过度激活,并对其发病起到重要作用。因此我们提出假设：通过建立UC动物模型,探讨抗MIF单抗对UC中NF-κB信号转导通路激活的阻断效应,及其对MIF等促炎因子表达的调控情况,了解其对UC的治疗作用。 2、 研究目的与意义目的： ①探讨抗MIF单抗对DSS诱导的小鼠结肠炎临床表现及组织损害的改善情况; ②讨抗MIF单抗对UC NF-κB信号转导通路过度激活的阻断效应,对细胞因子MIF、TNF-α、 IL-6水平的影响,及其对UC小鼠的保护作用。 意义：通过成功建立UC动物模型,采用抗MIF单抗进行干预,对小鼠进行疾病活动指数（DAI）和结肠组织学损伤程度的评估。应用ELISA、RT-PCR及免疫组化法等多种实验方法检测血清和（或）结肠组织中NF-κB、IκB及炎症因子MIF、TNF-α、IL-6等的水平,探讨抗MIF单抗对结肠炎临床表现及组织损害的改善情况,抗MIF单抗对UC NF-κB信号转导通路过度激活的阻断效应,对促炎细胞因子MIF、TNF-α、 IL-6水平的影响,及其对UC小鼠的保护作用,形成抗MIF单抗对UC治疗作用的新理论、新思路,促进学科发展。 3、 主要论点与论据 ①通过使用DSS造模,观察各组小鼠毛发、粪便性状、便血程度、精神状态及结肠组织HE染色、免疫组化镜下等情况,结果表明溃疡性结肠炎模型制备成功,抗MIF单抗干预后小鼠的表现及结肠组织的损伤均有好转,表明抗MIF单抗对结肠炎小鼠有一定的保护作用。 ②应用ELISA、免疫组化法分别检测各组动物血清及结肠组织中MIF、TNF-α、IL-6的水平,采用RT-PCR检测结肠组织NF-κB、免疫组化法检测结肠组织NF-κB、IκB的表达,结果表明抗MIF单抗可能通过抑制NF-κB信号通路的过度激活而对小鼠起保护作用。 ③课题的研究成果形成抗MIF单抗对UC治疗作用的新理论、新思路,这将对UC的临床研究具有非常重要的意义。 4、 创新点 ①通过抗MIF单抗实现了对TLR4/ NF-κB 信号通路的阻断,较深入研究了抗MIF单抗对MIF、NF-κB及TNF-α、IL-6 、IκB等下游促炎因子的影响,肯定了抗MIF单抗对UC的保护作用; ②首次应用生物制剂抗MIF单抗从UC炎症因子级联瀑布效应方面进行治疗探讨,并得出了较肯定的结论。 5、社会经济效益及存在问题近年来IBD的患病率全国范围内有上升趋势,广西的发病率也有了较大的提高,IBD以慢性病程、反复发作、逐渐加重为其特征,大部分患者需要终身治疗,但其发病机制至今尚未完全阐明,尚缺乏有效的治疗措施,而药物副作用较大,部分患者致残,外科手术复发率极高,严重地危害了人民的健康。本课题为IBD发病机制及治疗的研究提供新思路、新靶点,为广西IBD在发病机制及治疗方面的研究起到一定的促进作用,加强了广西IBD同行之间的交流与合作,促进学科的发展,抗MIF单抗的使用可能减轻了IBD的严重程度,减缓了疾病的进程,缩短了IBD的疗程,减少了病情的复发,较大程度地减轻患者的疾苦,提高了患者的生存质量,减少医疗费用,节约医疗资源,提高患者的社会创造价值,有助于患者家庭稳定,以及社会和谐与稳定,具有良好的社会效益和经济效益。由于研究经费有限,样本量偏小,有待于扩大研究样本,有待进行更多层次更多角度的深入研究。 6、成果简介 本项目为炎症性肠病（IBD）的相关研究,采用硫酸葡聚糖钠（DSS）建立IBD模型,采用抗MIF单抗进行干预。通过动物的临床特征及结肠组织损害情况来评估小鼠结肠炎的严重程度,探讨抗MIF单抗对UC小鼠的保护作用：应用ELISA和免疫组化法分别检测各组动物血清及结肠组织中的MIF、TNF-a、IL-6的水平,以探讨促炎细胞因子MIF、TNF-a、IL-6在IBD发病中的作用,以及抗MIF抗体对IBD的治疗效果。此外,采用RT-PCR检测结肠组织NF-κB、免疫组化法检测结肠组织NF-κB、IκB的表达,探讨抗MIF单抗对NF-KB信号转导通路的阻断作用,了解可能的作用机制,形成抗MIF单抗对UC治疗作用的新理论、新思路。 研究结果显示：抗MIF单抗可能通过拮抗NF-KB信号转导通路的过度激活达到其对UC的治疗和保护作用。