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系统性红斑狼疮（ SLE）是一种多系统受累的自身免疫性疾病。骨桥蛋白能诱导B细胞多克隆化,使之产生过量免疫球蛋白,膜蛋白CD40在活动期SLE患者B淋巴细胞的表达增加,其水平与疾病活动度有关。 本课题针对CD40和OPN各设计siRNA,构建真核表达载体。将构建成功的重组体采用脂质体转染小鼠J774.1细胞株,RT-PCR检测CD40和OPN mRNA表达水平的变化;检测上清中细胞因子IL-1等;TUNEL检测J774.1细胞凋亡情况。同时将重组体注射MRL-Lpr狼疮鼠,ELISA检测细胞因子TNF-α等细胞因子;RT-PCR检测脾脏CD40 mRNA及肾脏OPN mRNA表达的变化水平;免疫单扩法检测IgS、C3、C4及CRP的变化;间接免疫荧光检测dsDNA。从而进一步观察两段siRNA对SLE的潜在治疗作用,为SLE的基因治疗提供试验依据。 本实验具有广阔的临床应用价值。 本研究发现CD40和OPN的siRNA作用狼疮鼠后,小鼠24h尿蛋白含量下降,随着作用时间的延长小鼠24h尿蛋白含量逐渐下降,炎性因子的表达水平下降,小鼠肾小球的炎性细胞浸润减少,抗dsDNA抗体降低,小鼠脾组织中Th17细胞占CD4+ T细胞的百分比明显下降,而Treg细胞占CD4+ T细胞的百分比上升。因此,MRL/Lpr小鼠注射CD40和OPN siRNA载体后,肾脏中炎性细胞的浸润减少,肾小球IgG和C3沉积减少,24h尿蛋白含量下降,脾组织中Th17细胞的百分比下降,Treg细胞的百分比上升,说明OPN siRNA抑制其mRNA和蛋白后,MRL/Lpr小鼠肾脏炎症反应减轻,尿蛋白含量下降,肾小球IgG和C3沉积明显减少,同时,CD40和OPN siRNA可调节狼疮小鼠Th17/Treg细胞的平衡,提示其对狼疮肾炎有一定的治疗作用,为狼疮肾炎的治疗提供了新思路。
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