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[00335120]骨髓基质液微环境调控MSCs衰老及其逆转的研究

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技术详细介绍

本项目目的是通过蛋白组学方法研究对不同发育阶段骨髓基质微环境的可溶性因子,筛选出导致骨髓干细胞衰老的组分,探讨骨髓干细胞衰老机制,寻找延缓衰老措施。我们分离SD老年、青年和乳鼠BMSCs,体外培养,发现不同年龄组生长周期、克隆形成频率,生长曲线有差异,老年鼠BMSCs的增殖能力及存活力最差;分离了老年、乳鼠和青年鼠不同发育阶段骨髓基质液,通过2-DE电泳,质谱分析,鉴定出31种高表达的蛋白质;通过免疫组化分析骨髓干细胞随机分布,主要分布在松质骨,此外,还发现干细胞处于低氧的骨内膜微环境,促进造血干细胞增殖和分化。对其中与氧化损伤有关的Peroxiredoxin 2(prx2)进行克隆,构建表达载体pEGFP-prx2,转入用过氧化氢(H2O2)处理的MSCs及衰老大鼠骨MSCs细胞,对其细胞形态、增殖能力及细胞衰老特异性β-半乳糖苷酶原位染色,发现衰老MSCs恢复了一定的增殖能力,β-半乳糖苷酶染色阳性细胞数量减少(p<0.05),有显著性差异。证明了其是基质液中调控H2O2浓度,影响骨髓干细胞衰老的关键因子。有关其作用机制及信号转导途径还有待于进一步研究。

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