[00335111]RNA干扰CXCR4基因对上皮性卵巢癌侵袭、转移的抑制作用及其对EGFR信号通路分子机制的研究

1.任务来源： 本课题来自山东省医药卫生科技发展计划项目（2009HZ014）。 2.应用领域和技术原理：本研究依据RNA干扰能够特异性阻断目的基因表达的原理,成功构建了同时含3条特异性CXCR4siRNA片段的质粒,利用脂质体转染人卵巢细胞株SW626细胞,下调CXCR4基因的表达,通过体外实验观察CXCR4基因及蛋白的表达、细胞增殖、细胞迁移和侵袭能力的变化。建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,观察siRNA靶向沉默CXCR4基因对皮下移植瘤裸鼠的体内抑瘤作用。并进一步研究了siRNA沉默CXCR4基因促进上皮性卵巢癌细胞凋亡及通过EGFR信号通路作用的分子机制。 3.性能指标：成功构建了同时含3条特异性CXCR4siRNA片段的质粒,转染48小时后人卵巢癌细胞SW626的转染效率约为80%-90%。与对照组相比,干扰组的CXCR4mRNA及蛋白的表达均明显下降（P ＜0.01）。细胞的转移及侵袭能力明显减弱（P ＜0.01）。RNA干扰组裸鼠移植瘤大小、重量、CXCR4 mRNA及蛋白的表达均明显下调（P＜0.05）。JC-1法检测转染前后干扰组与空白对照组及空载体组相比,线粒体膜电位普遍降低（P＜0.001）,ASK1 mRNA的表达明显增多（P＜0.001）,干扰组细胞中EGFR及其下游信号分子ERK1/2、Akt、NFκBp65、TNF-α蛋白的表达较空白组及转染空载体组均明显降低（P＜0.05）,干扰组中CaspasE3、p-C-Jun、IκB-α蛋白的表达显著提高（P＜0.05）,差异有统计学意义。 4.与国内外同类技术比较：经查新,国内外未见通过构建同时含3条特异性CXCR4siRNA片段的质粒,体内外实验研究RNA干扰CXCR4基因对卵巢上皮性癌细胞增殖、迁移、侵袭的抑制作用及其对EGFR信号通路影响的文献报道。 5.成果的创造性、先进性：本研究依据RNA干扰能够特异性阻断目的基因表达的原理,成功构建了同时含3条特异性CXCR4siRNA片段的质粒,利用脂质体转染人卵巢细胞株SW626细胞,下调CXCR4基因的表达,应用RT-PCR及western blot检测CXCR4基因及蛋白的表达情况,应用MTT法检测细胞增殖能力的变化,应用Transwell小室模型检测细胞迁移和侵袭能力的变化。建立裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,观察siRNA靶向沉默CXCR4基因对皮下移植瘤裸鼠的体内抑瘤作用。我们还进一步探讨了siRNA沉默CXCR4基因对上皮性卵巢癌细胞凋亡及EGFR信号通路的影响。 6.作用意义： 本课题为卵巢癌生物治疗提供新的治疗靶点及实验室基础。 7.推广应用的范围、条件和前景：该研究成果论文分别发表在SCI收录期刊Biomed Pharmacother及《现代妇产科进展》杂志,培养硕士研究生2名,为该项目的推广应用起到一定的推动作用。