[00334233]芒果甙对FLT3-ITD突变阳性急性髓细胞白血病增殖的影响及其机制研究

1. 课题来源与背景 急性髓细胞白血病（acute myeloid leukemia, AML）是一类常见且异质性很强的血液系统恶性疾病。FLT3-ITD突变已被NCCN诊疗指南选作为AML危险度分层的指标之一。 FLT3基因（FMS样酪氨酸激酶3）是Ⅲ型受体酪氨酸激酶家族成员中的原癌基因。研究已经证实,FLT3-ITD的激活突变在配体非依赖性的情况下能够引起下游一些信号转导通路的异常活化,进一步产生促进增殖和抑制凋亡的作用,在白血病的发生以及进展中都起到极其重要的角色。芒果甙（mangiferin）是一种四羟基吡酮的碳糖甙。我们课题组的前期研究发现,芒果甙能显著抑制髓系白血病细胞株K562、HL-60细胞的增殖,干扰细胞周期,诱导凋亡,抑制白血病细胞及淋巴瘤细胞的侵袭转移能力及保护常规化疗药柔红霉素对小鼠心肌细胞的氧化损伤作用,上述研究表明芒果甙具有潜在的抗肿瘤药用价值。 2. 研究目的与意义 本项目用分子和细胞生物学的方法研究芒果甙对FLT-ITD阳性AML细胞增殖的影响,同时探讨PI3K/AKT、Shc/Ras/MAPK/Erk、FLT3-IT/STAT5、NF-кB等信号通路在芒果甙抗FLT-ITD阳性AML效应中的作用,为将芒果甙开发为一种新的白血病治疗药物提供实验和理论依据。 3. 主要论点与论据 本研究的意义主要体现在以下几点：（1）芒果甙作为中药芒果的单体成分,多项研究表明芒果甙具有潜在的抗肿瘤药用价值。FLT3-ITD的激活突变,在白血病的发生以及进展中都扮演着极其重要的角色。本研究首次使用芒果甙作用于FLT3-ITD表达阳性AML,初步探讨了其在FLT3-ITD表达阳性AML中的作用机理,为研究芒果甙作为在FLT3-ITD表达阳性AML的潜在治疗药物提供理论依据。（2）检测芒果甙对FLT3-ITD突变阳性的白血病细胞株MV4-11和FLT3-ITD阳性原代急性髓细胞白血病细胞增殖,凋亡的体外作用,为研究果甙抗FLT3-ITD突变阳性的白血病的潜在机制提供理论依据。（3）应用分子生物学手段建立FLT3-ITD突变阳性人白血病SCID小鼠模型,为下一步研究芒果甙抗FLT3-ITD突变阳性的白血病的体内研究提供条件。（4）检测芒果甙体内抗白血病作用,为进一步研究芒果甙抗FLT3-ITD突变阳性的白血病的作用机理及临床治疗奠定基础。（5）检测相关通路上下游基因的表达,进一步阐明PI3K/AKT、Shc/Ras/MAPK/Erk、FLT3-IT/STAT5、NF-кB等信号通路在芒果甙抗FLT3-ITD阳性急性髓细胞白血病细胞效应中的作用。为进一步深入研究芒果甙对FLT3-ITD突变阳性的白血病通过作用PI3K/AKT、Shc/Ras/MAPK/Erk、FLT3-IT/STAT5、NF-кB等信号通路引起的细胞凋亡以及为后续的研究提供理论依据。 4. 创见与创新 （1） 本研究首次发现芒果甙在体外具有抗 FLT-ITD 突变阳性急性髓细胞白血病细胞作用;（2） 本研究首次探讨了NF-кB信号通路在芒果甙抗 FLT-ITD 阳性急性髓细胞白血病细胞效应 FLT3 信号转导途径中的可能作用。本项目在研究过程中还发现：（1） 芒果甙可以通过ATR-Chk1通路诱导HL-60白血病细胞G2 / M期细胞周期停滞从而发挥抑制HL-60白血病细胞的作用。（2） USBC34蛋白在DLBCL中的高表达与年龄较大,GCB亚型,多结外受累和DLBCL的高IPI评分相关。USP34可以作为是评估DLBCL患者的有价值的标志物。（3） 利用计算生物学的方法,确定紫杉醇可能是治疗DLBCL的潜在药物。（4） miRNA-30a-5p的下调可能通过靶向各种前瞻性基因和通路在HCC的发病率和进展中发挥重要作用。 5. 社会经济效益,存在的问题 本课题也达到了预期的社会经济效益。FLT3-ITD突变AML患者对常规化疗不敏感,自体或异体移植也不能改善预后。目前还没有一种是真正FLT3特异性的靶向抑制剂,且临床毒副作用和继发耐药也成为当前治疗的一大障碍。因此,很有必要探索新的治疗FLT3-ITD阳性AML的药物。探讨芒果苷对FLT3-ITD突变阳性急性髓细胞白血病细胞MV4-11增殖的影响及其机制研究,可进一步阐明芒果甙FLT3-ITD阳性AML分子致病机制,为芒果甙治疗FLT3-ITD阳性AML提供理论基础,为AML治疗提供新思路。本课题完成了大部分的预期目标,研究发现了芒果苷可抑制 FLT3-ITD突变阳性急性髓细胞白血病细胞MV4-11增殖,阻滞细胞周期进程和促进细胞凋亡,其机制与芒果苷抑制FLT3活性继而影响下游与凋亡、增殖有关的信号传导通路有关。由于原代细胞的培养条件苛刻,实验过程中细胞状态不理想导致实验进程缓慢,具体实验还在进行中。动物模型已经建立,芒果甙作用于FLT3-ITD突变阳性急性髓细胞白血病的体内实验正在进行中。 6. 历年获奖情况 本研究技术指标为拟发表学术论文3篇,其中SCI收录1篇,国内核心期刊2篇。现本课题组已发表英文论文4篇, SCI收录4篇,国内核心期刊1篇。同时正在进行的有SCI 论文3篇,已经完成返修工作。