[00333817]游离microRNA表达谱对恶性胸腹腔积液诊断及抗肿瘤药物敏感性预测的研究

恶性胸腹腔积液（简称胸腹水）是指肿瘤转移到胸（腹）膜或原发于胸（腹）膜肿瘤引起的积液,占积液的20%～40%。鉴别良恶性胸腹水是困扰临床的一大难题。细胞学检查是最常见的诊断方法,尽管有较高的特异性,但因为标本采集和实验室操作等原因,其敏感性仅50%左右。胸（腹）腔镜等有创性检查虽然能诊断95%的胸腹水性质,但费用昂贵、风险较高。目前亟待找到一种比现有方法更准确可靠同时又简单易行的新方法来诊断良恶性积液。 寻找癌症的生物学标志一直以来都是一个重要的研究领域。由于体液的易于获得,人们更倾向于在体液中寻找生物学标志。传统的血液肿瘤蛋白标志物虽然有一定的应用前景,但限于特异性单克隆抗体研制的瓶颈,开发能够确诊肿瘤的标志物仍面临巨大的挑战。 近期,作为新的切入点,microRNA（miRNA）为癌症的诊断与治疗开辟了一条新途径。miRNA是一类新发现的、非编码的、大小为22nt左右的单链小分子RNA,通常在转录后水平调控基因表达。大多数成熟的miRNAs是RNA多聚酶II转录,由Drosha酶和Dicer酶进行加工而成的。成熟miRNAs与目标mRNA结合,形成了RNA诱导的基因沉默复合体。miRNAs与靶mRNA的3’端非翻译区（UTR）并不完全地互补配对,从而抑制基因表达。该过程有以下几个可能的机制,包括mRNA的降解,对翻译起始和延伸阶段的抑制,以及在细胞质内P小体上的定位。因为miRNAs的结合并不完全互补,所以它能与多种多样的mRNA结合,因此,一个miRNA的错误表达就会扰乱成千上万蛋白质的正确表达。miRNA 在细胞发育、凋亡、分化、增殖等重要的生理病理过程中发挥重要作用。 最新研究提示,在肿瘤发生发展、转移等微观层面,细胞可能主动或被动释放肿瘤内源性的miRNA进入外周循环,成为游离miRNA。游离miRNA是外周血肿瘤标志物新秀,能够用于肿瘤诊断与预后。但是游离miRNA是否可以作为恶性胸腹腔积液诊断及化疗药物敏感性预测标志物还不清楚。因此,建立和优化胸腹水miRNAs 检测的技术平台,筛选出恶性胸腹水特异性游离miRNAs 表达谱,并探讨游离miRNA 表达水平和抗肿瘤细胞药物敏感性的关系,为恶性胸腹水积液的诊断、个性化治疗、风险评估提供理论依据和实验证据。 现已经证明,miRNAs参与了人类癌症的发生。研究结果证实,许多miRNAs基因存在于那些与癌症有关的人类基因组脆弱区域。此外,miRNAs基因还不断被证实扮演着原癌基因和抑癌基因的角色。随着高通量miRNAs表达技术的发展和miRNAs在肿瘤发生发展中地位的明了,研究小组们开始探寻不同癌症中miRNAs的表达谱。Calin等人首先证实,他们的miRNAs芯片可以将B细胞性慢性淋巴细胞白血病（CLL）细胞和正常细胞区分开来。不久之后,Lu等[5]将基于微球的miRNAs分析方法,应用于20种不同的癌症后,发现每一种癌症都有一个特征性的miRNAs表达谱,大多数低分化肿瘤也可以根据miRNAs的表达水平确定其起源的组织或器官。癌症特异性的miRNAs表达谱可以寻低分化肿瘤的原发灶,从而确定组织来源,制定个体化治疗方案。 本研究拟通过建立高通量的筛选手段（Solexa测序技术）和精确性的个体验证技术（基于Taqman探针的实时荧光定量PCR技术）,捕捉恶性胸/腹水中上调的miRNA分子,以此建立恶性积液的游离miRNA生物标志物谱系。并进一步通过体外细胞实验,探讨游离miRNA表达水平与胸腹水肿瘤细胞药物敏感性的关系。以期为良恶性胸腹腔积液诊断和有效的个体化治疗方案提供理论基础和实验依据。