[00333575]参桂保心颗粒对心衰大鼠caspase-3、 MMP-2和心室重构的影响

课题来源与背景 充血性心力衰竭（CHF）是多种心血管疾病的最终归宿,整个过程伴随心肌损害和心室重构。中医认为心衰的病因病机属本虚标实,本虚为气虚、阳虚、阴虚,标实为血瘀、水停、痰饮。临床应用益气温阳、活血利水等方法,治疗心衰取得了良好的疗效,其抑制心室重构的研究在国内外正成为一个热点。 心室重构是一系列复杂的变化,其中心肌细胞凋亡和细胞外基质的纤维化或降解增加是心室重构的两个重要特征。心肌细胞凋亡的信号传导通路主要有两条,而这两条途径的最后都是caspase-3的活化,所以caspase-3是参与凋亡的最重要的蛋白酶之一,抑制其活化可以减少凋亡的发生。心室重构除了心肌细胞的内在改变,细胞外基质同样也发生了变化,它包括大量的结构蛋白如胶原等。修饰和降解心肌细胞外基质的基质金属蛋白酶（MMP）对于心室重构具有重要的意义,尤其是MMP-2在酶解细胞间基质的主要成分Ⅳ型胶原中有“钻头”的作用,其对心室重构的进程有重要的影响。 研究目的与意义 本课题旨在应用参桂保心制剂作用于异丙基肾上腺素造模的心衰大鼠模型,给药8周后检测心衰大鼠心肌组织caspase-3、MMP-2、TIMP-2的水平,BNP（脑钠肽）浓度,心电图,血流动力学指标,心胸比例,心室重量（VW）、左心室重量（LVW）、左心室重量指数（LVWI）及病理学改变（心肌细胞肥大、变性,间质充血、水肿、炎细胞浸润、结缔组织增生等）,并与其他各组进行分析比较,探讨该药对大鼠心肌损害和心室重构的抑制作用及其机制,评价该药物对慢性心力衰竭的治疗作用。 主要论点与论据 1.各组心室重量、心室重量指数比较,模型组VW、VWI高于其他各组,参桂保心高、中、低剂量组和芪苈强心组间无明显差异,提示心衰大鼠发生心室重构、心脏增大,而经过治疗后心衰得到改善。2.各组心电图变化无明显差异,包括QRS波群、ST段及T波等。3.血流动力学指标方面,参桂保心高剂量组的心率低于中、低剂量组,差异具有统计学意义,提示经治疗后大鼠心衰改善,心肌耗氧减少。其余指标如SP、DP等,各组间无明显差异。4.各组心胸比例,参桂保心高、中、低剂量组和芪苈强心组明显低于模型组,尤其以参桂保心高剂量组和芪苈强心组更为明显,提示经治疗后大鼠的心衰改善、心脏有所变小。5.血浆BNP（脑钠肽）：参桂保心高、中、低剂量组和芪苈强心组明显低于模型组,尤其以参桂保心高剂量组和芪苈强心组更为明显,提示治疗后大鼠容量及压力负荷减轻,心力衰竭好转。6.组织病理学检查：正常对照组心肌细胞排列整齐,心肌纤维呈短柱状,可见横纹。心肌细胞核呈卵圆形,较大,着色较浅,位于肌纤维中央,未见心肌细胞肥大现象;模型组可见肌纤维及间质发生凋亡或坏死,心肌纤维增粗、拉长,胞核着色深,细胞排列疏松,横纹不清楚或消失,局部组织纤维化,间质内有炎性细胞浸润;参桂保心高、中、低剂量组和芪苈强心组心肌细胞肥大、细胞变性、炎细胞浸润等均得到不同程度的改善。心脏组织病理学评分具有统计学差异。7.免疫组化法测定心肌Caspase-3、MMP-2、TIMP-2表达：各治疗组干预后均可降低心肌组织中Caspase-3和MMP-2的表达,其中参桂保心高剂量组优于中、低剂量组和芪苈强心组。各治疗组干预后均可升高心肌组织中TIMP-2的表达,其中参桂保心高剂量组和芪苈强心组优于中、低剂量组。8.Western blot测定心肌Caspase-3、MMP-2、TIMP-2表达：各治疗组干预后均可降低心肌组织中Caspase-3和MMP-2的表达,其中参桂保心高剂量组优于中、低剂量组和芪苈强心组。各治疗组干预后均可升高心肌组织中TIMP-2的表达,其中参桂保心高剂量组和芪苈强心组优于中、低剂量组。 创见与创新 通过本研究,证实以益气温阳、活血利水为治法的参桂保心制剂,具有保护心肌细胞、抑制心室重构、影响血流动力学、改善心功能的作用,其作用机制为抑制心肌细胞凋亡、减少胶原蛋白纤维化及细胞外基质的降解、减轻炎症反应等。研究成果为中药保护心肌、抑制心室重构、干预慢性心衰提供了理论及实验依据。该治法可有效阻止心力衰竭的不断进展,改善患者的临床症状。中医临床可以该治法为基础进行推广,临证加减治疗各类慢性心力衰竭,从而不断提高中药治疗心衰的临床疗效,最终使广大患者受益。 社会经济效益,存在的问题 1.实验设计存在不足之处,已在实验进行过程中及时正。如实验分组缺少药物对照组,已通过增加芪苈强心组得到完善;观察指标偏少,通过加入TIMP-2、BNP、Western blot、血流动力学指标、心电图、胸片等,使得实验内容更加充实。2.由于课题经费有限,部分研究内容未能进一步深入探究,可在今后的科研工作中继续不断探索。