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本项目为天津市高等学校科技发展基金资助项目,课题组针对云雾龙胆活性成分和内生菌的分离鉴定及其次生代谢产物的分离分析开展研究。 本项目从药用植物云雾龙胆中首次分离出9株内生菌:LD 1、LD2、LD3、LD 4、LD5 、LD6 、LD-B1、LD-b2和LD-I1。其中,对抑菌效果最明显的菌株LD5进行了多相分类鉴定。通过形态学、生理生化和16S rDNA系统进化分析,鉴定LD5和LD-b1分别为解淀粉芽孢杆菌和短小芽孢杆菌。薄层显色分析和高效液相色谱检测表明,菌株LD5和LD-b1能合成龙胆苦苷以及几种与云雾龙胆提取物中未知成分相似的成分。通过运用硅胶柱层析,聚酰胺柱层析,重结晶等方法从菌株LD-b1分离得到3个化合物,并应用二维波谱技术等方法鉴定出1个化合物为龙胆二糖,初步确定剩余2个化合物一个为六糖化合物,一个为酯类化合物。 通过液相色谱建立了菌株LD-b1中龙胆苦苷的测定方法。同时也建立了云雾龙胆中龙胆苦苷, 异荭草素3′-甲基酯和异牡荆甙的测定方法。 通过硅胶柱层析分离得到的龙胆苦苷, 异荭草素3′-甲基酯和异牡荆甙单体的色谱峰纯度达到99%。 本研究通过运用硅胶柱层析,聚酰胺柱层析,重结晶等方法从云雾龙胆中分离得到6个化合物,并应用波谱技术等方法鉴定了6个化合物的结构,它们分别是 -香树素(1),乌苏酸(2), -谷甾醇(3), -胡萝卜苷 (4), 龙胆苦苷(5), 异荭草素3′-甲基酯(6) 异牡荆甙(7) 异荭草素(8) 。通过GC-MS分析,从云雾龙胆中发现76个低极性小分子成分,从检出化合物类别看, 绝大部分为醛、醇、酯、酮、酸类化合物, 其中呋喃醛(11.078%),5-甲基-2-呋喃醛(7.259%),苯甲酸(6.495%),4-乙烯基-2-甲氧基苯酚(2.120%),棕榈酸(12.623%),亚油酸(4.445%),α-亚麻酸(3.228%),正十八烷酸(2.614%),正二十三烷(5.435%)等9种主要成分占总含量的55.30%。 通过柱层析和波谱分析,我们明确了云雾龙胆中的6种成分, 得到内生菌LD-b1中的三种次生代谢产物。为该类植物进一步有效的开发利用提供了一定的科学依据, 对推动该类植物的研究及其代替资源内生菌的研究具有重要意义。
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