[00332909]基于PGE2研究九里香叶防治膝骨关节炎的药效物质基础及其作用机制

骨性关节炎是一种常见的慢性关节疾病,与多基因表达异常有关。前期研究工作基础发现中药九里香叶具有防治鼠膝骨关节炎（OA）的功效。本课题的目的在于探索九里香叶抗炎镇痛的药效物质基础在防治膝关节炎作用机制中的重要作用。利用HPLC建立中药九里香叶指纹图谱;利用HPLC建立中药九里香叶抗炎镇痛的谱效关系,发现九里香叶中有效成分主要存在于二氯甲烷和乙酸乙酯层中;通过角叉菜胶致足肿胀模型建立起抗炎镇痛的血清指纹图谱,发现入血后出现16个峰,其中有6个为原型,其余为代谢峰;分析、分离鉴定九里香叶中抗炎镇痛的药效物质基础,分离得到四个有效成分,包括了5,7,3’,4’-四甲氧基黄酮（TMF）及Phebalosin。通过复制兔膝OA模型,进行光学镜下及切片检查,检测九里香可有效保护膝关节软骨平面,抑制软骨细胞凋亡,抑制体内软骨细胞中β-catenin的表达,抑制关节腔滑液中促炎因子的表达水平。制备含药血清,分离培养OA软骨细胞,通过MTT法测定九里香含药血清的剂量,即50mg/kg、100mg/kg及200mg/kg。通过流式法、caspase-3蛋白检测发现九里香含药血清可抑制OA软骨细胞凋亡,呈剂量依赖性。通过RT-PCR及Westernblot法,发现九里香含药血清可抑制β-catenin及其COX-2的基因和蛋白表达,抑制β-catenin转录因子报告基因的荧光素酶表达,抑制细胞凋亡,呈剂量依赖性。以PGE2为诱导剂,上调EP2/EP4/cAMP/PKA信号通路表达,正反馈性上调β-catenin及其COX-2的基因和蛋白表达,诱导正常软骨细胞凋亡。而九里香则可抑制PGE2诱导的EP2/EP4/cAMP/PKA/β-catenin信号通路表达,抑制β-catenin转录因子报告基因的荧光素酶表达,从而抑制软骨细胞凋亡。本课题将为建立中药九里香质量标准,研究九里香抗炎镇痛药理学活性,中药九里香的二次开发提供有益的科学依据。 [1] Longhuo Wu, Haiqing Liu, Linfu Li, Hai Liu, Kai Yang, Zhaowen Liu, Hao Huang. 5,7,3’,4’-tetramethoxyflavone exhibits chondroprotective activity by targeting β-catenin signaling in vivo and in vitro. Biochem Biophys Res Commun. 2014, 452（3）:682-688. （SCI 收录, IF=2.281） [2] Longhuo Wu, Haiqing Liu, Rui Zhang, Linfu Li, Jialin Li, Haibo Hu, Hao Huang. Chondroprotective activity of Murraya exotica through inhibiting β-catenin signaling pathway. Evid-Based Compl Alt. 2013, 2013 :752150. （SCI 收录, IF=2.175） [3] Wu L, Huang X, Li L, Huang H, Xu R, Luyten W.Insights on biology and pathology of HIF-1α/-2α, TGFβ/BMP, Wnt/β-catenin, and NF-κB pathways in osteoarthritis. Curr Pharm Design. 2012, 18 （22）. 3293-3312.（SCI 收录, IF=3.311） [4] 吴龙火*, 温慧玲, 李加林, 等. 九里香含药血清抗软骨细胞凋亡的机制. 中国老年学杂志. 2014, 34（17）:4869-4871。 [5] 吴素珍, 刘霞, 李加林, 胡海波, 张蕊, 吴龙火．槲皮素对兔软骨细胞增殖的影响．时珍国医国药. 2014,25（1）: 16-17。 [6] 吴龙火, 温慧玲, 金奇, 等. 九里香指纹图谱与其抗炎活性的灰关联度分析. 中国实验方剂学杂志. 2013, 19（4）: 338-342。