[00332740]HBV特异性免疫效应细胞预防肝移植术后乙肝复发的研究

乙肝患者如果肝移植术后不进行有效地抗乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）治疗,乙肝复发的风险为80%,而3年存活率仅为44%。因此预防乙肝复发是提高乙肝肝移植患者生存率和生存质量的关键问题。乙肝肝移植术后由于病肝被切除,此时体内病毒负荷相对较低,如果能够进行相应的治疗,清除体内残存的病毒颗粒,就可能实现停用乙肝免疫球蛋白及抗病毒药物治疗。 本课题以此为思路,首次采用相应的特异性免疫效应细胞（Immune Effector Cells,IEC）,实现对HBV特异性的杀伤,从而实现病毒的完全清除。 在本研究中通过转HBV基因小鼠实验验证IEC体内、外抗HBV的作用,明确预防乙肝复发的机制,为临床应用奠定基础。在动物实验基础之上,采取患者自身外周血单核细胞进行相应处理（HBcAg及HBsAg处理）,得到活化的树突状细胞Dendritic Cells,DC)与自体淋巴细胞共培养后获得特异性IEC,实现体外对HBV特异性的杀伤及对HBV的抑制作用,包括HBVcccDNA。通过检测免疫细胞表型、HBV基因序列和相关细胞因子的变化探讨其相应的机制,为临床应用奠定基础,从而为建立新的乙肝肝移植术后预防HBV复发的方案提供理论依据。我们针对以上目标,对肝移植术后预防乙肝复发过程中的难点问题进行了深入的研究,主要研究成果如下： 1.证实了HBV转基因小鼠及乙肝患者来源的对HBV特异的IEC,与体外异体的肝细胞共培养时,不会引起排斥反应,IEC自身不表达HBVcccDNA及HBV DNA,其安全性良好。 2.探索出HBV感染患者来源IEC在体外对HBV复制具有抑制作用,同时能抑制细胞核内HBVcccDNA的复制,但并不引起HBV全基因序列的变异;Th1/Th2动态平衡及细胞因子在控制体外HBV复制中发挥重要作用,也是减轻肝细胞损伤的重要因素。 3.动物实验显示了转HBV基因的小鼠来源的特异性IEC能对自体小鼠体内的HBV复制具有抑制作用,并且可改善肝功能。 4.揭示了HBV感染患者体内免疫微环境对DC的作用下,DC成熟受到限制,而解除抑制后的DC可以恢复其激活T细胞的功能,并分泌大量IL-12诱导Th亚群向Th1方向极化;在DC诱导下的免疫反应中起主要作用的淋巴细胞是Tc细胞;在肝移植前加强患者抗病毒治疗,提高DC对HBsAg和HBcAg抗原肽的递呈能力,诱导Th1、Tc1应答,恢复患者针对HBV的主动免疫力有重要意义; 5.初步验证了该种治疗方案可以提高乙肝患者肝移植术后HBsAb的血清学滴度、减少肝移植术后HBIG的用量,并有希望为最终实现乙肝肝移植术后停用抗病毒药物打下实验基础。 综上所述,本项目经多年的探索,从动物到人体,从体内到体外进行深入研究,揭示了特异性IEC在人及小鼠体内、外对HBV复制均具有抑制作用,同时具备很好的生物安全性,有重要的治疗价值。此研究为免疫细胞疗法在临床中的应用提供理论依据,为建立新的乙肝肝移植术后预防乙肝病毒复发的方案提供实验依据。截止该项目结题,已在《Viral Immunol》、《IUBMB Life》等学术期刊上发表SCI论文4篇,在国内期刊上发表论文8篇,参加国内会议交流1次,培养博士后1名、博士研究生3名和硕士研究生6名。