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[00332554]对虾白斑杆状病毒定量PCR检测研究

交易价格: 面议

类型: 非专利

交易方式: 资料待完善

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技术详细介绍

对虾白斑杆状病毒(WSBV)是引起对虾病害的一种主要病原,是一种没有包涵体的新型杆状病毒,该病毒毒力强,宿主范围广,死亡率高,迄今为此没有有效的治疗方法,因此必须建立简便快速、有效的检测方法,通过早期诊断、及早预防,防止病毒的发生。该项目是建立一种快速的PCR检测对虾白斑杆状病毒的方法,依据纯化后病毒DNA酶切片段序列设计、筛选一对特异性强、灵敏度高的引物,建立模板快速制备技术,开发了快速的对虾白斑杆状病毒PCR检测试剂盒。与其它方法比较,具有以下几个优点:1.灵敏度高、特异性好。每毫克组织10-100个病毒即可检出。2.取样量少,仅需1-10毫克组织。3.简便快速,半天即可完成10个样品的检测。为促进该项目成果向产业化、商品化发展,不断改进检测方法,简化模板制备,摸索PCR反应条件,进一步缩短反应时间,同时改进试剂盒配方,提高试剂盒稳定性,实验证明,在37°C放置七天,试剂盒仍较稳定。在上述PCR检测的基础上,在反应体系中设计一个内标模板,建立了定量PCR内标法,采集大量感染程度不同的样品,进行定量PCR检测,初步确定病毒感染的危险临界值为每毫克组织 1000个病毒粒子。根据上述结果,开发了半定量PCR检测试剂盒。目前上述试剂盒,已在全国各沿海城市推广使用。该课题完成对虾白斑杆状病毒PCR检测试剂盒的研制;建立定量PCR检测方法;发表论文一篇。

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