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对KRAS、NRAS、BRAF和PIK3CA基因突变的检测对指导肿瘤患者精准靶向用药和预后判断至关重要。本项目
通过两重ddPCR成功实现在两管内对KRAS、NRAS、BRAF和PIK3CA基因的14种热点突变进行定性检测。方法检测灵敏度高，能够检测出低至0.01%丰度的突变靶标。在30例临床样本的检测中，各个靶标的检测结果与直接测序法的一致性均达到100%。并进一步通过增加荧光通道数量，构建四通道ddPCR实现不同点突变的分型与定量。定量结果与预期具有良好的一致性，R2均达到0.999以上，定量检测限均低至1 copies/ul。在对7例KRAS突变型的临床样本检测中，成功实现突变型的再分类与定量检测，并且通过拷贝数的计算确定样本突变率。总的来说，与现有的直接测序法相比，本研究具有以下优势: (1) 方法检测灵敏度高，能够检测丰度为0.01%的突变。 (2)单管反应能够检测的靶标重数多，能够实现4种/3种不同靶标的同时检测，样本消耗低。 (3)检测时间短，整个检测流程所需时间小于5小时，而直接测序法所需时间大于24小时。 (4) 与现有的利用ARMS-PCR法的商用试剂盒相比，本研究能检测到野生型探针覆盖到的未知突变，并能实现突变位点的分型与定量分析，这
是ARMS-PCR所无法实现的。因此，多重ddPCR是一种在肿瘤多位点突变检测中具有很大应用潜力的方法
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