[00326442]医疗诊断用胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶的产业化制备
交易价格：
面议
类型：
非专利
交易方式：
资料待完善
联系人：
尹春丽
所在地：陕西西安市
- 服务承诺
- 产权明晰
-
资料保密
对所交付的所有资料进行保密
- 如实描述
技术详细介绍
在克隆获得了CHO和CHE的基因基础上，构建了能高效可溶性表达CHO和CHE的重组大肠杆菌在摇瓶中的初步试验结果表明CHO和CHE在大肠杆菌中实现了高效表达，纯化后比活性高产品或工艺创新技术成熟度可达八级该成果的实施将使CHO和CHE生产成本大幅度降低，为CHO和CHE的工业化生产提供了一种新的途径
1主要内容
（1）以链霉菌和假单胞菌基因组为模板，分别扩增获得CHO和CHE基因全长序列，然后通过PCR扩增不同长度截短型的基因片段构建多种CHO和CHE全长序列和截短型片段与分子内伴侣共表达体系，筛选获得能高效可溶性表达CHO和CHE的重组大肠杆菌
（2）分别在在10L和100L发酵条件下优化培养基组成、培养温度、诱导剂浓度、诱导时生物量以及诱导时间等参数，提高重组CHO和CHE的可溶性表达
（3）优化重组CHO和CHE蛋白的冻干保护剂组份及冻干工艺参数，使冻干酶活性回收率达到95以上
2创新点
（1）构建了胆固醇氧化酶（CHO）和胆固醇酯酶（CHE）全长序列和截断型片段与分子内伴侣共表达体系，已经实现了重组CHO的高效可溶性表达，目前正在构建CHE的共表达体系
（2）建立了一步亲和层析纯化重组蛋白的工艺条件，通过筛选获得CHO和CHE蛋白稳定剂，解决了两种重组酶在纯化过程中容易聚集失活的问题，使蛋白纯度超过95同时建立了重组CHO和CHE的冻干工艺条件
3社会及环境效益
(1)CHO和CHE制备方式主要是从野生菌发酵液中提取，存在产率低、纯化过程繁琐等不足通过重组菌发酵制备CHO和CHE，生产成本会大幅度降低，对工业化生产方法的改进具有行业引导作用
(2)我国医疗诊断用酶90以上依赖进口成果大幅度降低了CHO和CHE这两种酶的价格，可解决我国医疗诊断用酶完全依赖进口的局面
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