[00306604]儿童肺炎支原体抗体IgM阳性过敏性紫癜Th17细胞及相关细胞因子的检测
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马蕾
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技术详细介绍
本项研究：儿童肺炎支原体抗体IgM阳性过敏性紫癜急性期外周血Th17细胞及相关细胞因子的检测，来源为滨州市科技发展计划项目2011ZC0909。
该项研究主要依据是：过敏性紫癜（Henoch-SchonleinPurpura，HSP）是儿童时期最常见的血管炎之一，它以非血小板减少性紫癜、关节炎或关节痛、腹痛、胃肠道出血及肾炎为主要临床表现。多发生于学龄期儿童。严重影响儿童健康。目前该病的病因及发病机制尚不清楚，发病主要与机体免疫异常有关，另外凝血机制及遗传因素也参与其中。近年来大量的临床研究显示较多的过敏性紫癜病例合并肺炎支原体感染，但尚缺乏支原体感染致HSP的确切证据。
通过检测正常对照组、支原体感染（MP）组及支原体抗体IgM阳性过敏性紫癜组（HSP-MP）组患儿体内TH17细胞的百分率及其相关因子IL-17、IL-6、TGF-β的水平，进一步探讨支原体感染对过敏性紫癜机体免疫功能的影响，从而揭示过敏性紫癜的发病的免疫机制，为过敏性紫癜的免疫治疗提供新的思路。
该项主要研究内容是选择过敏性紫癜病人，进行肺炎支原体抗体IgM检测，如初次检测阴性，可间隔4-7天后重复送检。选择相同年龄、性别构成比的支原体感染非过敏性紫癜病人及健康体检儿童做对照组，将研究对象分为正常对照组、MP组、HSP-noMP组，HSP-MP组，通过采用流式细胞仪检测各组研究对象外周血中Th17的百分率ELISA法检测血清中Th17相关细胞因子IL-17、IL-6、TGF-β的含量，进而分析Th17细胞及相关细胞因子在儿童肺炎支原体抗体IgM阳性过敏性紫癜发病过程中的作用。探讨支原体感染对过敏性紫癜机体免疫功能的影响，探索Th17细胞在支原体感染过敏性紫癜的发病中的作用。提示：Thl7/Treg免疫失衡可能参与了MP-IgM阳性HSP的发病过程。为过敏性紫癜的治疗提供新的靶点和途径。本研究同时对肺炎支原体性肺炎患儿不同时期外周血中Thl7、IL-17A的含量进行检测，实验结果显示MPP患儿急性期组外周血单个核细胞（PBMC）中Thl7的百分率和IL-17A水平均显著高于健康对照组及稳定期组（P＜0.01），急性期热程≥10d组患儿PBMC中Thl7的百分率和IL-17A水平显著高于急性期热程＜10d组（P＜0.01），进一步得出结论：MPP患儿外周血Thl7的百分率及IL-17A的浓度明显增高，以热程≥10d者更显著，治疗后稳定期外周血Thl7的百分率及IL-17A的浓度接近正常，提示其与MPP的发病机制有关。为过敏性紫癜及支原体感染的治疗提供新的靶点。课题组对219例大叶性肺炎病例分析结果显示：肺炎支原体感染引起大叶性肺炎发生率较高，表现多样。肺炎支原体抗体检测阳性与阴性者在临床表现、实验室检查、治疗及预后方面无明显差异。血沉增快、CRP增高提示存在支原体感染可能，但差异无明显统计学意义。结论：大叶性肺炎临床表现在肺炎支原体抗体阳性与阴性者中无明显差异，其治疗方面倾向于应用大环内酯类药物。从而为临床大叶性肺炎抗生素的选择提供了理论依据，起到了指导大叶性肺炎临床治疗的积极作用，促进患儿疾病的康复，缩短住院时间，有良好的社会效益。
该项目的主要创新点是：探讨肺炎支原体感染对过敏性紫癜机体免疫功能的影响，探索Th17细胞在肺炎支原体感染过敏性紫癜的发病机制中的作用。同时探索Th17细胞在支原体感染中的作用，为过敏性紫癜及支原体感染的治疗提供新的靶点和途径。
Th17细胞是一类新型CD4+T细胞，它与Th1、Th2、调节性T细胞（Treg）一起构成了CD4+T细胞的4个主要亚群。Th17细胞参与了多种免疫相关性疾病。目前各级医院已普遍开展T细胞亚群免疫功能检测，Th17检测可用于临床，了解病人的免疫状态，指导病人的治疗。实验数据也提示从免疫学角度对过敏性紫癜及支原体感染进行分析可得到大力推广，为过敏性紫癜及支原体感染的治疗及疗效评估提供新思路。
目前存在的主要问题是Th17细胞检测技术质控要求严格、且需要将分离的外周血单个核细胞进行温育，耗时较长。项目推广需要有专业人员进行操作，并做好严格的质控。
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