[00306574]产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌MLST分型对耐药传播及致病机理的影响

　　肺炎克雷伯菌可导致败血症、肝脓肿等重症感染，多认为与耐药传播、毒力和荚膜血清分型密切相关。而碳青霉烯类抗生素是抗菌谱最广，抗菌活性最强的一类β-内酰胺抗生素，已经成为治疗严重肺炎克雷伯菌感染最主要的抗菌药物之一。但是，随着临床上广泛应用，其耐药性也不断增加。有研究表明碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKp）的感染与住院时间延长、住院费用增加及不良的临床结局密切相关，近来随着致死率逐渐攀升，已经成为了临床死亡率增加的独立预测因子。因此，逐步更新和完善CRKp耐药及致病力传播机制的监测策略，寻找可以有效解决抗CRKp感染的方法，是降低临床死亡率的关键，并将对减少临床住院时间及减轻病人经济负担有重要作用。 　　明确高毒力肺炎克雷伯菌的耐药性、致病力及分子流行病学特点，是控制高毒力肺炎克雷伯菌的耐药进展、减少hvKP菌传播的关键。资料显示，随着抗生素的广泛应用，hvKP菌的耐药性逐渐升高，近年来，针对hvKP菌株的耐药性已逐渐成为研究热点，而其耐药性的增加也让临床针对hvKP菌株的治疗在抗生素上的选择更加拙荆见肘。为此，对hvKP菌株耐药性及感染传播的控制已经成为临床治疗的关键。本研究从肺炎克雷伯菌碳青霉烯类耐药机制入手，利用碳青霉烯酶为切入点，以分子流行病学及传播机制为主线，抓住其在荚膜血清分型及毒力基因分布上的特点，探究我院hvKP菌耐药现状及传播机制。 　　中性粒细胞（neutrophils，PMN）是炎症过程中的重要效应细胞，PMN凋亡是炎症从发生发展向消退转变的关键环节，对维持内环境稳定和促使已发生炎症的局限及消退具有重要意义。大量研究证明，PMN凋亡延迟与脓毒症发生发展及预后恶化有密切关系。这是由于PMN正常凋亡过程受抑制，巨噬细胞无法识别和吞噬凋亡的PMN，导致其作用时间延长，并释放大量炎症因子而加重炎症反应及扩散的结果。可见，PMN凋亡延迟导致过度活化是脓毒症进展引起全身炎性反应综合征或多器官功能障碍综合征的重要原因。本研究拟率先开展中性粒细胞凋亡在hvKP脓毒症方面的研究，并通过结合体内外试验，评估中性粒细胞凋亡在hvKP脓毒症中发挥的作用。本项目对开启hvKP脓毒症的研究提供了新思路，为寻求临床治疗的新靶点提供了新的理论依据。 　　本项目对我院碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌（CRKP）的产碳青霉烯酶情况及分子流行病学进行研究。首次发现并报道了在一家三甲医院中同时存在四种主流（IMP-4，KPC-2，NDM-1及VIM-2）的碳青霉烯类酶的流行，凸显了我院碳青霉烯类耐药机制的多态性。MLST显示产KPC-2酶菌以ST11型为主，但呈现出多克隆传播。而产NDM-1酶菌株以ST263型单克隆传播；并且伴随ESBLs基因，16SrRNA甲基化酶基因及PMQR基因等共同播散。blaKPC-2基因定位于～65kbIncL/M质粒主要分布于ST395，ST11，ST134及ST39菌株中。而定位于～100kbIncA/C质粒则分布于ST37，ST1153，ST890菌株中。而blaNDM-1基因则定位于～70kbIncA/C质粒播散于ST263型菌株。而blaVIM-2基因定位于约40Kb的不可分型质粒。首次完成对我院主流的碳青霉烯类酶——KPC-2酶的基因环境的探究。首次发现不同ST分型的产KPC-2酶菌株存在不同的基因环境，且与经典的基因结构——质粒pKP048的环境不同。其中以基因结构platformiii分布最广，存在多种ST分型中，表明我院blaKPC-2的基因环境处于不断的进化过程中，而这种基因环境的变化或有助于其在不同ST分型菌株间的质粒上相互传递，也是造成在我院广泛播散的主要原因。为医院感染控制提供了理论依据。初步完成了CRKP菌株的高毒力荚膜血清分型筛选及毒力基因检测，并做到了切实有效的应用和推广。首次在CRKP菌株中筛选出高毒力荚膜血清分型菌株。而非高毒力CRKP菌株则以wzi47-K47荚膜血清型为主，同时也存在wzi64-K64、wzi8-K8等其他血清型的流行。产KPC-2酶肺炎克雷伯菌主要以fimH-1基因和mrKD基因等毒力基因为主，高生物膜形成能力菌株主要集中于A3/ST11，，D/ST65，E/ST1456，F/ST23菌株中，而低生物膜形成能力菌株主要集中于C/ST15中。ST11型菌株抗中性粒细胞吞噬较低。首次发现一株产KPC-2酶高毒力肺炎克雷伯菌（hvKP）株，其在体内外均表现出高毒力和高致病性。为筛选出荚膜靶抗原提供了依据，并验证分析了高毒力高耐药“超级细菌”的存在。首次完成了中性粒细胞凋亡在hvKP菌的致病中作用的初步研究。首次在体内外证实hvKP感染后PMN凋亡较非hvKP感染显著延迟。hvKP菌感染后可促进PMN的呼吸爆发能力减弱，并可增加炎症因子（IL-1β及TNF-α）释放量显著增加。为寻找新的高毒力肺炎克雷伯菌脓毒症感染的治疗靶标奠定了基础。 　　本项目相关研究结果已在国内外发表相关论文20篇，其中SCI论文10篇，CSCD-C期刊10篇，其中1篇SCI被他引8次，3篇SCI被他引3次，2篇SCI被他引2次。