[00306566]肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因SNaPshot技术检测方法的建立与研究
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面议
类型：
发明专利
技术成熟度：
已有样品
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交易方式：
资料待完善
联系人：
朱海燕
所在地：浙江
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资料保密
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技术详细介绍
目前有报道采用多重荧光定量PCR技术结合酶切的方法针对肺炎克雷伯菌KPC-2和KPC-3型碳青霉烯酶进行分型，最新的文献报道采用多重荧光定量PCR结合分子信标技术对11种类型的肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因进行区分。该11种碳青霉烯酶基因型是有5个不同的基因多态性位点构成，单核苷酸多态性(singlenucleotideploymorphism，SNP)是指在基因组内某核苷酸位置上因单个或多个核苷酸的替代、插入或缺失而形成的分子多态。SNaPshot是一种基于单碱基延伸原理的基因分型新方法，可以同时对多种基因突变位点高通量鉴别，方法为设计单条检测探针，使其将要延伸的第一个碱基就是需进行基因分型的位点，用荧光标记的双脱氧NTPs(ddNTPs)作为测序底物，使其测序反应只延伸一个碱基，从而能够鉴定该SNP。SnaPshot能同时对7-8个不同的SNP位点进行96个样本基因分型，是一种快速、高通量的基因分型新方法，可加快基因分型的研究速度，该技术的出现为大规模基因突变位点的筛查提供了一种快速、准确、高通量的诊断方法，弥补了基因芯片方法不稳定、荧光定量PCR检测数量有限等不足。对于肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因分型及新基因筛查相关工作开展较少，国内并无该方面研究。而且对于每种肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因亚型的生物学功能尚不清楚，因此本课题基于SNaPshot技术原理，对于15种类型的肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶基因的分型对于深入研究其生物学功能提供可靠的实验基础。
对传染病病原体快速、准确地检测和鉴定是有效预防传染病发生和控制致病菌迅速传播的前提和关键。目前在传染病相关病原体诊断领域仍然处于采用培养、分离等常规方法，对于日常工作的鉴定需要很长的周期，而且需要同时进行多项实验才能准确对病原体进行鉴定。本课题使用SNaPshot检测探针，通过一次PCR扩增后分析11种碳青霉烯酶基因中包含的5个基因多态性位点，并对社会群众肺炎克雷伯菌感染情况及携带碳青霉烯酶基因类型进行调查，有利于掌握辖区内人群产碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌感染及基因类型情况，为流行病学监测、疾病防控提供完整、可靠的数据。因此，该技术形成成熟的产品可进行转让和产业化生产，会具有相当可观的经济效益。
目前市场上成熟的产品大部分采用荧光定量PCR和免疫学方法进行诊断，如果能研发出快速、高通量、稳定、高灵敏度的检测产品，产业化转化不成问题，课题合作单位也具有分子诊断产品产业化和生产的能力，保证研发的试剂盒及时产业化，并且课题参加单位每年均有大量的传染病相关现场样本及大型生物样本库，对于检测试剂的验证具有相当的优势，可以全面的评价试剂的应用性能。
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