[00306506]实时荧光定量PCR快速诊断肺炎链球菌及其分型技术的建立与应用
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面议
类型：
发明专利
技术成熟度：
已有样品
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交易方式：
资料待完善
联系人：
刘白云
所在地：广西壮族自治区
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资料保密
对所交付的所有资料进行保密
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技术详细介绍
1、课题来源与背景：
课题来源于柳科综［2014］第20号文下达的2014年柳州市应用技术研究与开发计划课题（合同编号2014J030422）。课题针对针对肺炎链球菌特异基因lytA及该菌常见的21种致病性血清型建立TaqMan荧光探针法，探讨该方法对临床标本直接进行血清学分型的可能性。
2、技术原理及性能指标：
本课题技术原理主要为荧光定量PCR法：PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；PCR扩增时，Taq酶的5'-3'外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。性能指标：针对肺炎链球菌种属特异性基因lytA及该菌常见的21种血清型（1，2，3，4，5，6A/B，7A/F，8，9V/A，10A/B，12A/B/F，14，15，18B/C，19A，19B/F，20，22A/F，23F，33A/F，35B，38）设计引物和探针，构建TaqmanPCR体系，并运用于临床。研究结果：对135株肺炎链球菌菌株及1209份临床样本进行检测，结果表明荧光定量PCR法血清学分型的灵敏度为94.2%，特异度为70%。1209份临床样本仅培养出16份肺炎链球菌；运用Taqman荧光探针法对1209份临床样本进行检测，肺炎链球菌阳性样本为44例，Taqman荧光探针法对临床样本肺炎链球菌阳性检出率更高。开创荧光定量PCR方法直接检测临床标本，并对阳性标本进行血清学分型的研究技术，无需进行细菌培养，不受抗菌药物影响，只需少量临床样本即可检测出来病原体，3～5小时即可完成诊断等特点，不仅能快速对肺炎链球菌感染进行诊断，及时控制病情发展，亦可对肺炎链球菌行血清型分析，初步了解柳州市儿童肺炎链球菌血清群的分布状况，可为国家选择适合中国国情的疫苗提供流行病学依据。
3、技术的创造性与先进性：
目前国内尚未见有用TaqmanPCR法直接检测临床标本并进行肺炎链球菌血清分型的研究报道。
4、技术的成熟程度，适用范围和安全性：
技术构建成功，已用于1209份临床标本检测，适用于痰、咽拭子、血液、脑脊液等常见临床标本的直接检测。
5、应用情况及存在的问题：
本地区内由19F、19A、23F、6A、6B5种血清型别引起的儿童感染肺炎链球菌型别占可分型型别的71%（因此，综合本课题研究及临床荟萃结果，提示仅需使用上述5种血清型别的引物及探针，即可检测约70%以上的儿童肺炎链球菌血清型别。因此，通过本课题的研究及进一步的临床荟萃分析，可将研发的引物和探针范围缩小至1种种属特异性基因lytA及该菌常见的5种血清型19F、19A、23F、6A、6B，可进一步优化流程及节约实验成本。
6、历年获奖情况：
无。
7、成果简介可向社会公开。
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