[00291460]苜蓿根瘤菌耐盐基因及蛋白组学研究
交易价格：
面议
类型：
非专利
技术成熟度：
正在研发
交易方式：
完全转让
技术入股
许可转让
联系人：
林念文
所在地：宁夏回族自治区
- 服务承诺
- 产权明晰
-
资料保密
对所交付的所有资料进行保密
- 如实描述
技术详细介绍
①技术性能指标1、该项目利用Tn5-10.0063a转座子获得在0.00.4mol/L NaCl的FY培养基上不能生长的盐敏感突变株，发现了4个基因：pha20.001、pha20.002、pha20.003、pha20.004，并得出了它们在同一个启动子的控制下进行转录的结论。项目组克隆了这4个基因。2、项目组通过测定不同的无机离子对盐敏感突变株生长影响，证明这4个基因对耐盐能力具有重要的作用，这4个基因的转入，能够不同程度地恢复相应突变株的耐盐性。3. 项目组测定了CHDM0.000.001及其突变株的细胞内的离子含量，证明了pha2基因簇与钠、锂离子输出有关，pha2基因簇编码多亚基的单价阳离子/氢离子逆向转运蛋白。4.该项目率先在黑龙江开展了CHDM0.000.001的pha2基因簇耐盐碱根瘤菌基因和蛋白质组学研究方面的序列分析、克隆和功能鉴定研究，有望在分子水平上选育出更多的优良根瘤菌资源。②技术的创造性与先进性本项目采集了大庆地区不同盐碱地草场中的苜蓿，从中分离出了耐盐碱的苜蓿根瘤菌菌株CHDM0.000.001(Sinorhizobium fredii)，利用Tn5-10.0063a转座子对该菌株进行随机基因突变，对Tn5插入位置侧翼序列进行测序，结果发现突变株是由于4个基因突变所致，分别将它们命名为pha20.001、pha20.002、pha20.003和pha20.004，它们在同一个启动子的控制下进行转录，对耐盐碱的苜蓿根瘤菌CHDM0.000.001的耐盐能力具有重要的作用。我们测试了CHDM0.000.001野生型和突变株的细胞内的离子含量，结果发现pha20.001、pha20.002、pha20.003和pha20.004的各个突变株随时间的增加不断积累钠离子和锂离子。野生型的CHDM0.000.001则不积累钠离子和锂离子。这充分说明了pha2基因簇与钠、锂离子输出有关。综合上述的结果，我们认为pha20.001、pha20.002、pha20.003和pha20.004基因簇编码多亚基的单价阳离子/氢离子逆向转运蛋白，通过克隆该基因簇，进而将该基因簇转移到目的根瘤菌中，可以提高目的根瘤菌的耐盐碱性，使根瘤菌能够在盐碱地中发挥一定的固氮作用，扩大根瘤菌的适用范围，具有广阔的研究和应用前景。③技术的成熟程度，适用范围处于开发阶段，技术相对成熟，适用于农牧业中的牧草栽培基础和应用基础研究。④应用情况及存在的问题有待于进一步敌对机理和应用技术方法、应用的剂型进行开发研究。
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