[00290705]中国马铃薯主栽品种DNA指纹图库的建立(登记)
交易价格：
面议
类型：
非专利
技术成熟度：
正在研发
交易方式：
完全转让
技术入股
许可转让
联系人：
林念文
所在地：宁夏回族自治区
- 服务承诺
- 产权明晰
-
资料保密
对所交付的所有资料进行保密
- 如实描述
技术详细介绍
1、项目研究结果（1）确立了SSR分子标记是马铃薯品种纯度鉴定的理想工具本研究比较了传统的品种纯度鉴定方法与分子生物学标记方法的优缺点：SSR分子标记反映的是遗传本质上的差异, 用于品种鉴定时具有周期短, 不受环境条件的影响, 真实可靠。克服了传统的品种纯度鉴定方法（形态学方法，蛋白质电泳法，同工酶法）的不足；与其他化学化工<其它化学化工分子标记（RFLP标记，RAPD标记，AFLP标记）相比，SSR标记作用于整个基因组,它对DNA的质量和数量要求不高，具有多态性好、可靠性高、实验操作简单、方便、快捷等优点,成为马铃薯品种鉴定的最佳手段。（2）筛选了特异性强，相互之间没有拮抗作用的4对引物用于品种纯度鉴定引物的兼容性和引物浓度的比例是PCR反应的2个核心因素，平衡每对引物的浓度使每个等位基因都能获得足够的扩增量, 是优化多重PCR反应条件的关键。本试验筛选出4对引物，每对引物扩增的特异性条带分部在不同的范围，避免了相互之间的拮抗作用，保证了试验的顺利进行。（3）优化了马铃薯品种纯度鉴定方法的电泳系统马铃薯品种鉴定-SSR分子标记采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，通过比较不同电泳参数（聚丙烯酰胺凝胶的浓度、电泳电压、染色方法）对电泳结果的影响。确定了适合马铃薯SSR标记的电泳检测体系即：聚丙烯酰胺凝胶的浓度为12%；电泳电压为170.00V；染色方法为溴化乙锭染色。在此条件下，多态性条带分离效果最好，最清晰。（4）建立了马铃薯品种纯度鉴定的多重PCR反应体系模型探讨了多重PCR反应体系主要成分、引物不同比例关系及退火温度对SSR标记扩增的影响。在不改变其它成分浓度的条件下，对PCR反应体系的4个组分（Taq酶、MgCl2 、模板DNA、dNTPS）进行浓度或用量梯度试验；利用正交设计L9（34）对反应体系的4对引物组合（STM0.000.0014、Pat、SSI、UGP）在3个水平上进行优化；利用温度梯度筛选引物的最佳退火温度。通过对试验结果的比较分析，最终确立了马铃薯SSR标记多重PCR反应优化体系,总体积为20.00μL；2.5μL 25 mM MgCl2，0.00.6μL 10.00 mM dNTPS，Taq酶0.00.8 U，模板DNA80.00 ng；4 mM的4对引物之间的用量比为2：1：2：3，退火温度为57℃。优化后的反应体系重复性好，扩增结果稳定可靠，能够明显区分不同的马铃薯品种。多重PCR反应体系模型的建立也为
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