[00288672]融合蛋白pd20.00-TNFa靶向治疗胃癌肝转移的实验研究
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类型：
非专利
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正在研发
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许可转让
联系人：
林念文
所在地：宁夏回族自治区
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技术详细介绍
肝转移是晚期胃癌患者最主要的死亡原因之一，目前尚无有效的防治方法。由于同一类型肿瘤中不同亚系的存在，导致转移的特性不同。如果能够找到可与具有肝转移能力胃癌细胞特异性结合的分子，从而携带抗癌药物或抑癌基因作用于这类细胞，则可有效阻断胃癌细胞肝转移的发生。
在前期工作中，本项目组成员与肿瘤生物学国家重点实验室合作，有以下发现：1) 以胃癌肝高转移潜能细胞XGC9811-L为靶标，利用噬菌体随机肽库筛选技术获得的Pd20.00呈现噬菌体可与靶细胞特异性结合，结合后通过其外源呈现肽pd20.00的作用可内化入靶细胞；2) 体外特异性检测实验发现：多肽pd20.00可与具有胃癌肝转移能力的细胞和组织结合，其结合力与胃癌肝脏转移能力的高低相关； 3）pd20.00 与靶细胞XGC9811-L结合后具有一定抑制靶细胞肝转移能力的作用。以上实验结果提示：pd20.00有可能作为具有肝转移能力胃癌细胞的导向肽，携带抗癌药物或抑癌基因并协同作用，从而有效阻断胃癌细胞向肝脏转移。
为了证明这一设想，在本项目中我们选取迄今为止抗肿瘤活性最强的细胞因子---肿瘤坏死因子（TNFɑ），利用DNA重组技术，将胃癌肝高转移潜能细胞导向肽pd20.00与TNFɑ进行全基因合成，克隆pd20.00-TNFɑ融合基因；构建原核表达载体，在大肠杆菌BL21 中进行诱导表达；后利用镍柱纯化法纯化该融合蛋白。进一步通过L929细胞毒性实验和转移相关的体外实验证实：纯化后的融合蛋白具有明显的体外杀伤活性，并具有抑制胃癌肝高转移潜能细胞的侵袭、运动和促进胃癌细胞早期调亡的能力。为了验证融合蛋白是否既具有胃癌肝转移的靶向性，同时又具有抗肿瘤能力，我们进一步将pd20.00-TNFɑ融合蛋白通过裸鼠尾静脉注入胃癌肝转移模型鼠体内，发现此融合蛋白具有明显的肝脏归巢性，并可有效抑制胃癌细胞肝脏转移的发生，实验证实：融合蛋白Pd20.00-TNFɑ具有靶向性治疗胃癌肝转移的作用，这为今后开发抗胃癌肝转移靶向药物奠定了实验基础。
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