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[00281052]用于T-A克隆的T载体制备方法

交易价格: 面议

类型: 发明专利

技术成熟度: 正在研发

专利所属地:中国

专利号:CN200510123112.7

交易方式: 完全转让 许可转让 技术入股

联系人: 南京大学

所在地:江苏南京市

服务承诺
产权明晰
资料保密
对所交付的所有资料进行保密
如实描述
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技术详细介绍

本发明公开了用于T-A克隆的T载体制备方法,选择一个高拷贝数的常用质粒,以此质粒为模板设计四对引物,通过定点突变构建两种在特定序列有差异的突变质粒;在两种突变质粒的多克隆位点处分别构建TTTTAAA及TTTAAAA序列盒,并分别引入两个不同的酶切位点BamHI和HindIII;将突变质粒分别导入细菌扩增,并将扩增的等量质粒用可识别TTTAAA序列的内切酶切割,混合、变性、复性,反应后的混合物酶切,去除亲本分子,即可分离出T载体。本发明采用独特的生物合成技术生产T载体,这种由生物合成的天然T载体,具有合成方便,生产成本低,克隆效率高,质量稳定等特点,用本方法构建的T载体完成了多个基因的克隆,结果表明其重组效率达到了90%以上。

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