本发明公开了斯氏副柔线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂Pj_CPI基因克隆、重组表达方法及应用,通过斯氏副柔线虫转录组测序,预测出的编码基因与已公布的线虫数据库比对分析,找出斯氏副柔线虫特有基因,用RT‑PCR方法从斯氏副柔线虫中扩增出特有基因Pj_CPI,克隆测序后,构建到原核表达载体pET30a中,转化至E.coli BL21,进行诱导表达,用Western‑bloting法验证重组蛋白rCPI的免疫原性。斯氏副柔线虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂Pj_CPI基因重组蛋白经纯化后,建立了家畜斯氏副柔线虫iELISA检测方。