本发明提供了一种引物对、试剂盒及用途和检测紫花苜蓿产品中是否含有大豆的方法,涉及生物技术领域。该引物对包含引物MD5‑F和引物MD5‑R,分别具有如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列,可以同时扩增出紫花苜蓿和大豆的不同片段长度的DNA片段,因此一次扩增即可分辨出待测样品中是否含有紫花苜蓿和/或大豆。使用上述引物对检测紫花苜蓿产品中是否含有大豆,具有灵敏性强、准确率高、重复性强和快速便捷等优点,能够进行大批量紫花苜蓿产品的检测,缓解了现有技术中缺乏一种检测紫花苜蓿饲料中是否掺杂大豆的方法。