本申请提供一种具有抗肝癌细胞增殖活性的小球藻多糖的提纯方法,所述方法包括,通过离子交换层析法和苯酚‑硫酸比色法联用,对小球藻粗多糖PCA分离得到PCA1、PCA2以及PCA3粗多糖提取物;通过分子排阻层析法和苯酚‑硫酸比色法联用,对所述提取物净化,得到精PCA1与精PCA2;通过四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法,检测精PCA1与精PCA2对SMMC‑7721的抗增殖作用;通过氯化钡‑浊度法检测精PCA1与精PCA2中硫酸根含量。本申请提供的纯化方法得到PCA2,以1g/L的浓度干预人肝癌细胞SMMC‑7721经过24小时后,SMMC‑7721的细胞增殖明显降低75.49%。