本发明提供一种青稞‑内生真菌共生体的构建方法,包括以下步骤:(1)青稞种子的消毒;(2)青稞无菌苗的培养;(4)接菌:在青稞无菌苗上胚轴部位进行人工接菌:在青稞无菌苗上胚轴处竖切小口,将培养好的菌丝塞入小口处,置于恒温(25±2)℃条件下黑暗培养7‑10天,然后在恒温(25±2)℃、光照强度为2000~3000lx、光照时间16h·d‑1条件下培养7‑10天,得到青稞幼苗;(5)移植:将的青稞幼苗洗净根部培养基后,移入基质中进行培养,直至种子收获;(6)内生真菌检测:移栽一段时间后检测内生真菌的接种情况,剔除接种未成功的幼苗,剩余幼苗成熟后收集种子。本发明通过在青稞上胚轴接种禾草内生真菌,构建了青稞‑内生真菌共生体,创建了新的青稞种质资源。