1 研究背景
热原反应（pyrogen reaction）临床上在进行注射、静脉滴注大量输液时，由于药液中含有热原物质，病人在0.5～1h内出现冷颤、高热、出汗、昏晕、呕吐等症状，高热时体温可达40℃，严重者甚至可休克，这种现象称为热原反应。在每年临床不良反应报告中占比超5%以上，引起热原反应的主要原因是产品本身受细菌污染、注射液或输液器中污染的发热物质所引起的。热原的致热量因菌种而异，如革兰阴性杆菌致热能力最强；由于注射途径不同，引起发热的程度也有所差异。随着来源于各种病毒、细菌等微生物或蛋白质的创新生物制品的发展，传统热原检测方法（包括RPT、BET）在机制上日趋不能满足控制此类产品安全性的需求。2006年，创新单抗药物 TNG1412 致其Ⅰ期临床试验中几乎所有受试者发生高热、多器官炎症反应及功能衰竭的“细胞因子风暴”灾难性不良反应事件即是上述问题的直接体现。因此发热物质的控制是临床用药的安全性使用重要环节。
发热物质控制可以直接反应企业生产条件是否符合GMP要求，符合安全使用，是药物安全性检查的重要项目，直接关系用药安全。许多原材料检查也必须进行内毒素检测方能用于GMP生产，以达到设计标准的质量要求。
目前有于产品工艺不同，引入发热物质的途径不一，有从生产过程中环境控制污染引入的、产品工艺过程使用添加带入、产品原材料本身引起，等多种因素。目前检测发热物质的方法多样，如热原法、细菌内毒素检查法等 ，有定性检查、半定量检查、定量检查等。 生产企业如何合理选择，既能有效控制药物中发热物质限量，又能使方法在生产中易于实施监控，因此合理的选择方法成为制订检测标准的关键。本项目明确各步骤中关键点和解决方案，为方法开发和制订提供明确方案，为高效生产和产品安全使用提供技术支撑。
2技术原理及指标
研究通过系统的排除干扰试验方法、难溶性药物溶剂的适用性考察等手段，通过系列完整合理的方法开发研究为不同要求制订合理可靠的发热物质控制方法，有利于不同用途需求。
在利用该策略为多个品种建立个性化发热物质检查方法的同时，创新性地研究出具有普适性的难溶性药物、溶剂的干扰排除、生物大分子干扰、样品溶液颜色干扰等诸多难点问题，为产品发热物质检查方法的开发建立提供了切实可行的方法。
体外培养人单核细胞系（HL-60,THP-1）用于检测供试品中含有的能激活人单核细胞释放肿瘤坏死因子α(TNFα)、和白细胞介素-6(IL-6)等促炎细胞因子的污染物。研究过程：a供试品对细胞生长曲线的影响、b细胞对不同浓度供试品刺激产生细胞因子的测定、c细胞对外加标准参考品刺激的反应测定、标准曲线建立、d细胞对供试品检测灵敏度测定、e细胞对供试品检测定量下限的确定。
3主要创新点
本项目基于2020版中国药典的热原检查方法和细菌内毒素检查法，经高度概括和提炼多年的实验研究经验，独创性开发了有干扰品种重组C因子法和单核细胞活化反应测定，对药典经典方法不能建立质量标准的不足进行了补充，满足了企业对原材料及制剂的发热物质的控制要求。用较为简单明了的方式，呈现出发热物质检查方法开发的难点及相应的解决方案，给广大从事药理毒理专业人员提供了标准化的质量标准检验方法开发程序，确保每个产品所建立的检验方法在不同实验室之间结果的一致性和准确性。
项目组在利用该策略为多个品种建立个性化发热物质检查方法的同时，创新性地研究出具有普适性的生理活性药物、难溶性药物、溶剂的干扰排除、生物大分子干扰、样品溶液颜色干扰等诸多难点问题，为产品发热物质检查方法的开发建立提供了切实可行的方法。
4 小结
本研究通过重组C因子法和单核细胞活化反应测定法补充了传统热原检查法的缺点，满足各类材料、原料药、制剂、生物制药产品的需求。通过系统的排除干扰试验方法、难溶性药物溶剂的适用性考察等手段，通过系列完整合理的方法开发研究为不同要求制订合理可靠的发热物质控制方法，有利于不同用途需求。前期开发的药品原料药和制剂项目研究均获得国家药典委员会审批认可，作为产品质量控制的一项，发挥重要作用。目前已完成合同金额超50万元。
随着药物、医疗器械研发技术的不断发展，新剂型、新材料应用，以及生物制药技术的发展，对传统的热原物质检查提出了挑战，如何合理高效的控制热原物质对生产企业及药品监管部门都是需重视的问题。热原物质检查是注射用药物首要控制的成分，直接影响药品的安全使用。可应用于企业上市产品热原物质检查，药品监管部门在监督评价，在产品研发、生产、存贮过程中质量监控的一部分，有利于提高产品质量，保障用药安全。