本发明公开了一种肉葡萄球菌合成培养基及其发酵液的制备方法及应用。其中肉葡萄球菌（Staphylococcuscarnosus）合成培养基，是按1L体积计算，由如下重量的原料组成：无水葡萄糖10~50g，赖氨酸0.1~1.5g，缬氨酸1.0~5.0g，甘氨酸0.1~1.5g，精氨酸1.0~5.0g，脯氨酸1.0~5.0g，谷氨酸5~10.0g，色氨酸0.1~0.5g，胱氨酸0.1~1.5g，盐酸硫胺素1.0~3.0mg，泛酸钙1.0~3.0mg，烟酸1.0~3.0mg，硫酸锰1.0~3.0mg，磷酸二氢钾0.1~1.0g，七水硫酸镁0.1~0.8g，七水硫酸亚铁0.005~0.010g，三水磷酸氢二钾1.0~5.0g，3‑（N‑吗啉）丙磺酸6~10g，剩余为水；还公开了肉葡萄球菌发酵液的制备方法。本发明的肉葡萄球菌合成培养基配方搭配合理，营养丰富，适合肉葡萄球菌的生长需求，通过本发明方法获得的肉葡萄球菌的生长量与通常所用的LB（Luria‑Bertani）培养基相比提高了5%。