本发明提供了一种引物对及包含其的试剂盒、用途和检测蒺藜苜蓿生态型A17和R108的方法,涉及生物技术领域。该引物对包含引物NST480‑F和引物NST480‑R,分别具有如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示序列,可以同时扩增出蒺藜苜蓿生态型A17和R108不同片段长度的DNA片段,因此一次扩增即可分辨出待测样品中是否含有蒺藜苜蓿生态型A17和R108。使用上述引物对检测蒺藜苜蓿生态型A17和R108,具有灵敏性强、准确率高、重复性强和快速便捷等特点,缓解了现有技术中存在的缺乏一种快速而准确的方法检测和鉴别蒺藜苜蓿生态型A17和R108的问题。