本发明公开了一种铱配合物其制备方法及应用,所述铱配合物是以三氯化铱为原料,经与2‑苯基吡啶和1,10‑邻菲啰啉共轭衍生物复合配位得到,标记为Ir‑ONOO。本发明提供了一种用于检测水溶液中过氧亚硝酸根离子的探针。本发明还提供了上述铱配合物在检测水溶液中过氧亚硝酸根离子的应用。本发明设计合成的铱配合物探针Ir‑ONOO能够单一选择性、高灵敏度的识别水相中的过氧亚硝酸根离子。本发明的铱配合物探针Ir‑ONOO具有较长的磷光发射寿命,利用时间分辨技术屏蔽背景荧光的干扰,成功应用于生物活细胞成像,有效检测和跟踪细胞内内源性过氧亚硝酸根离子的含量变化,在临床疾病标志物的检测中具有良好的应用前景。