本发明公开了一种铱配合物探针及其制备方法和应用,属于探针技术领域。该铱配合物探针由金属中心、环金属配体和含有苯硼酸结构的辅助配体组成,结构如下所示:该铱配合物在检测pH值过程中荧光发射波长不发生变化,随pH值逐渐降低,发光强度逐渐增强,在酸性、中性以及碱性条件下均具有很好的稳定性,并且具有良好的酸碱可逆性,所以可准确、灵敏的检测出环境pH值;与此同时,该铱配合物探针具有较低的细胞毒性和优异的线粒体靶向能力,能够精确抵达线粒体,所以还可以准确、灵敏的检测出细胞微环境pH值探针。该铱配合物探针的制备方法反应条件温和,制备过程简单,产率较高,具备大规模生产的条件。