本发明公开以LppA基因为检测靶标进行牛支原体检测的组合物、试剂盒和方法。本发明的组合物的检测靶标为牛支原体的LppA基因,可以针对该基因中的多种不同片段,并且通过实验验证了本发明的组合物可设计出多种不同具体组合情形以应用于传统PCR、basic RPA、nfo RPA和exo‑RPA等多种扩增方法,另外可借助琼脂糖凝胶电泳、测流层析试纸条以及恒温荧光扩增仪来观察实验结果。本发明的组合组能够做到牛支原体标准株及野生株种内的保守性以及牛支原体与其他致病菌种间的特异性。基于本发明的组合物可建立特异性好、敏感性高且可以稳定重复的牛支原体快速检测方法,具有操作简单,便捷省时,无需大型的实验仪器设备。