1 研究背景
微生物检查方法主要包括无菌检查法和微生物限度检查法。标准的建立需要遵循严格的法规和标准，而法规和标准的制定和更新是一个持续的过程，需要科研、监管和工业界的共同努力。我国药品微生物检验标准化研究起步较晚，微生物检查方法研究工作开展时间较短，加之前版药典规定的微生物检查方法有大幅度修订，药品生产企业和医疗机构人员在开展该项工作时对新版药典要求理解不够透彻、检验能力不足、无法建立微生物检验方法或者建立的检查方法不够规范，与标准要求还存在一定的差距。近几年来本项目深入研究了1200多份生产企业提交的微生物检查方法研究资料，并对其中所反映的问题进行了详细的分类和整理。通过这些分析，我们发现企业和医疗机构在微生物检查方法研究中，存在一系列较为突出的问题。首先，供试液的制备、稀释液的选择是一个关键点，其选择和使用不当可能会直接影响微生物检测的准确性和可靠性。其次，试验菌的选取也是至关重要的，不合适的试验菌可能会导致检测结果的偏差或无效。此外，加菌方式的不当操作也可能对检测结果产生不良影响。而在这些环节中，抑菌活性的有效去除无疑是最具挑战性和关键性的一个环节。
现有各国药典或标准操作规范对微生物检查方法的建立和实施做了概括性描述，具体执行时需要有较强的专业背景及较长时间微生物检验经验积累的人员才能准确把握微生物检查的要点难点，更遑论方法建立时面临的困惑。本项目研究过程中查阅大量文献，发现目前尚未有比较全面清晰的微生物检查方法策略。基于建立质量标准中微生物检查法时所面临的困难和困惑，本项目认为有必要构建一个全面清晰的微生物检查策略框架，通过建立技术路径图，明确各步骤流程及开发过程中的关键要点和解决方案，降低微生物检查方法开发的难度及成本，提高方法开发过程的工作效率和成功率，同时更有利于培训人才，有助于提升企业及检验机构微生物检验人员专业素养，对推动行业发展具有重要意义。
2主要创新点
本项目基于2020版中国药典的微生物检查方法，经高度概括和提炼多年的实验研究经验，独创性设计了两张技术路径图，直观地展现了方法开发的策略。用较为简单明了的方式，呈现出微生物限度检查和无菌检查方法开发的难点及相应的解决方案，给广大从事微生物检验的专业人员提供了质量标准检验方法标准化的开发程序，确保每个产品所建立的检验方法在不同实验室之间结果的一致性和准确性。
项目组在利用该策略为多个品种建立个性化微生物检查方法的同时，创新性地研究出具有普适性的中和剂配方，配方主要成分有聚山梨酯80、卵磷脂及L-组氨酸。聚山梨酯80、卵磷脂都具有很好的乳化和增溶特性，可以提高某些药物成分在水中的溶解度，有利于药物分散，可制备出均一稳定的供试液，为微生物限度方法研究奠定基础。同时这两个中和剂还可以保护微生物免受药品中可能存在的抑菌成分影响，可用于降低药品的抑菌性。在此基础上再配上L-组氨酸，优化中和剂配方，使消除药品中抑菌性的作用发挥到最大。L-组氨酸作为一种氨基酸，能提供微生物生长所需的营养，同时还能在缓冲剂方面发挥作用，有助于微生物的生长和检测。项目组经过多年研究制定了独有的中和剂浓度比例配方，该配方在微生物限度检查方法开发中，尤其是在强抑菌性的品种中，能较好地解决样品沉降较快、药渣与菌体混在一起不易分离、供试液无法过滤及强抑菌作用难以消除等诸多难点问题，在强抑菌性品种的检查方法开发中广泛使用，为产品微生物检查方法的开发建立提供了强有力的技术支撑。目前正在申请专利中。
3 小结
本项目遵循《中国药典》2020版四部通则生物检查法及药品微生物检验相关指导原则，独创性设计了两张技术路径图，构建了无菌检查与微生物限度检验的策略，同时创新性地研究出具有普适性的由一定比例聚山梨酯80、大豆卵磷脂和组氨酸组合形成中和剂配方，在已建立的57个微生物限度检查方法中，该配方使用率高达70%。目前本项目成功为34家企业及医疗机构建立了81个微生物检查方法并为单位创造经济效益约190万元，每个方法均由项目组独立创建，体现了原创性研究的精髓。这些方法经过企业或医疗机构的严格验证后，得到合同单位认可，并被正式纳入质量标准或操作程序（SOP）文件中，为企业的新药或新的医疗器械的审批以及生产过程控制发挥了较大的作用。同时通过技术培训活动，项目已培训近30人，进一步提升了本省生产企业人员微生物检测的能力和水平。此外，项目还建立了18个品种的国家评价性抽验微生物检查方法，攻克了供试液制备与抗菌活性消除的关键技术难题并发表科技论文9篇，成功申请了一项实用型专利。近几年来项目组所取得的成果一方面被监管部门用于产品上市前的注册检验和上市后的质量监督，另一方面被生产企业用于生产过程或研发阶段产品的质量控制，减少了因微生物污染导致的药品安全事件和健康问题，为社会公共健康做出了贡献，取得了一定的经济效益和社会效益。