一种发光细菌冻干保护剂、冻干粉及其在水质综合毒性在线监测中的应用。每L发光细菌冻干保护剂由如下组分组成:脱脂乳100—200g,蔗糖20—120g,氯化钠10—60g,其余为水。发光细菌冻干粉由发光细菌冻干保护剂加入发光细菌的菌液中制备而成。该发光细菌冻干保护剂或发光细菌冻干粉可作为检测制剂用于在线水质毒性监测中。该发光细菌冻干粉复苏后置于4°C菌种储存杯冷藏,可供在线毒性监测仪器使用15d,能够替代进口冻干保护剂,降低在线毒性监测仪器的试剂耗材运行成本,提高在线毒性监测仪器的持续稳定运行,为水质安全起到生物毒性预警作用。