本发明涉及一种检测亚硝酸根的紫外荧光分子探针N,N’‑5‑二吲哚‑2,6‑吡啶二甲酰胺的合成方法及其在各类实际样品的亚硝酸根检测中的应用。这种以双吲哚为荧光团,吡啶二甲酰胺为支架的双臂穴状化合物N,N’‑5‑二吲哚‑2,6‑吡啶二甲酰胺的合成,实现了对亚硝酸根的专一性识别。探针具有光学性质稳定,特异性好,灵敏度高,易制备,成本低的特点,并且可以在更温和的pH值条件下(2~5)检测亚硝酸根。用N,N’‑5‑二吲哚‑2,6‑吡啶二甲酰胺测定各类实际样品中的亚硝酸根的含量,可以通过颜色的变化定性的判断样品中是否含有亚硝酸根,同时可以通过紫外荧光光谱测定样品的亚硝酸根含量。