本发明公开了疯草内生真菌的一对特异性分子检测引物以及利用疯草内生真菌的一对特异性分子检测引物对疯草是否被疯草内生真菌感染进行检测的方法,一对特异性分子检测引物包括具有碱基序列的上游引物OmtssuF和下游引物OmtssuR,上游引物OmtssuF和下游引物OmtssuR是在被疯草内生真菌感染的疯草中特异性地扩增出164bp的产物。本发明根据疯草内生真菌的mtSSU编码序列,设计出了一对分子特异性检测引物,该检测引物特异性强、灵敏度好;本发明的检测方法通过对待检疯草的DNA进行扩增,可以得到164bp 的条带,对疯草上其他真菌DNA和疯草本身DNA不能扩增出任何产物,能用来快速、准确、便捷地检测疯草样品中是否被疯草内生真菌感染,特异型强、实用性好,对疯草的防治具有重要的意义。