本发明提供一种同步高产L‑色氨酸与L‑缬氨酸的大肠杆菌基因工程菌及其用途。所述基因工程菌是在大肠杆菌的基因组上，将色氨酸操纵子的启动子替换为Ptrc启动子的同时引入trpE（S40F）突变；将由Ptrc启动子控制的aroG（S180F）基因整合至tyrR位点；将由Plac启动子控制的serA（H344A,N364A）基因整合至yjiV假基因位点；将由Plac启动子控制的glnA基因整合至ycjV假基因位点；再将Ptrc启动子控制的枯草芽孢杆菌alsS基因整合至yghx假基因位点获得。利用该菌株进行摇瓶发酵可在22‑28h内积累L‑色氨酸达10‑14g/L，同时缬氨酸积累量达5‑7g/L，总产酸能力比色氨酸生产菌株提高了50％左右，同时菌体OD600相差不大，不存在生长问题，但单位菌体产酸能力明显提高了120％，大大提高了碳源和细胞的有效利用。
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